传统技术（如常规IHC或流式细胞术）在解析Treg时常常面临局限：

1）信息丢失： 流式细胞术无法保留细胞在组织中的原始位置和空间分布信息。

2）标志物单一： 仅凭FOXP3或CD25等单一标志物，难以区分功能不同的Treg亚群（如具有强抑制功能的效应Treg和静息状态的初始Treg）。

3）缺乏关联： 无法直观地观察Treg细胞与细胞毒性T细胞、肿瘤细胞等其他关键成员的“社交网络”，难以全面解读其免疫抑制功能。

我们需要一双能“同时看清多个目标”且“保留案发现场”的“火眼金睛”。

多重免疫组化技术是一项革命性的技术，它允许我们在同一张组织切片上，通过多轮标记与洗脱，同时检测多个蛋白标志物，并对其进行精准的原位分析。

艾克发生物提供的mIHC解决方案优势在于：

1）多靶标共定位： 可同时检测FOXP3、CD4、CD25、CTLA-4、Ki-67、Pan-CK等指标，实现对Treg细胞及其所处微环境的全面解析。

2）保留空间信息： 清晰展示Treg细胞在肿瘤核心、侵袭边缘或三级淋巴结构等不同区域的分布差异，关联其临床意义。

3) 精准细胞分型： 通过组合标记，可明确区分：

效应Treg： FOXP3+ CD4+ CD25high CTLA-4+

非Treg： FOXP3- CD4+ CD25low

增殖性Treg： FOXP3+ Ki-67+

表型与功能关联： 通过分析Treg与CD8+ T细胞的邻近关系，直接评估其潜在的免疫抑制活性。

卵巢癌6标7色：红色CD4 绿色 FOXP3 青色PANCK 黄色CD68 紫色 CD56 白色CD20 蓝色DAPI

1.通过CD4 和 FOXP3 标记辅助性T细胞与调节性T细胞，评估T细胞亚群的平衡及免疫抑制程度；

2.用CD20 识别 B 细胞、CD56 标记自然杀伤细胞，能反映适应性与固有免疫的应答活性；

3.以CD68 标记巨噬细胞、PANCK 区分肿瘤细胞，可明确免疫细胞与肿瘤细胞的空间关联及浸润特征；

4.综合这些标志物的表达情况，能全面判断肿瘤免疫微环境是偏向免疫激活还是免疫抑制，为免疫治疗方案的选择提供关键依据。

三、案例分享:mIHC下的Treg世界

文章标题：在肝细胞癌中，索拉非尼通过VEGFR/AKT/Foxo1信号通路促进调节性T细胞分化，从而降低其自身疗效

关键词：肝细胞癌(HCC)、索拉非尼(Sorafenib/Sora)、VEGFR(血管内皮生长因子受体)/AKT(蛋白激酶B)/Foxo1(叉头框蛋白O1)信号通路、调节性T细胞(Treg细胞)

全文总结：

该研究针对索拉非尼作为晚期HCC一线治疗药物时，获得性耐药导致疗效受限且相关机制未完全明确的问题，尤其是探究其是否通过调控Treg细胞影响肿瘤免疫微环境并诱导耐药；研究采用了获取HCC患者肝组织样本，利用C57BL/6J、OT-II、Foxp3^GFP小鼠构建Hepa1-6肝癌移植瘤模型，结合RNA测序、流式细胞术、实时聚合酶链反应、酶联免疫吸附试验、免疫印迹、多重免疫荧光染色等技术，检测免疫细胞比例、基因与蛋白表达、信号通路活性，同时开展索拉非尼单药及联合抗CD25抗体或Foxo1抑制剂的体内治疗实验等方法；最终得出索拉非尼通过抑制VEGFR/AKT信号通路、激活Foxo1，促进Treg细胞分化并增强其免疫抑制功能，形成免疫抑制性肿瘤微环境，进而降低自身疗效，而联合使用抗CD25抗体或Foxo1抑制剂可抑制Treg细胞分化，缓解免疫抑制，增强索拉非尼对HCC治疗效果。

mIHC实验由艾克发生物提供技术支持：

（Panel1:CD4、p-AKT、DAPI；Panel2：CD4、Foxp3、DAPI）

通过特异性标记和可视化分析，探究HCC肿瘤微环境中CD4⁺T细胞内AKT磷酸化状态与调Treg细胞(以Foxp3为特异性标志物)数量的关联，进而验证索拉非尼通过VEGFR/AKT/Foxo1信号通路调控Treg细胞分化的机制。

四、艾克发生物,您的肿瘤免疫研究伙伴

艾克发生物深耕多重免疫组化领域，拥有丰富的Panel设计经验和稳定的技术平台，能为您的肿瘤免疫研究提供全方位的支持：

1)专业的Panel设计： 根据您的研究目的，为您量身定制最合适的标志物组合。

2)稳定的实验流程： 优化的染色体系，确保信号强、背景低、结果可重复。

3)强大的数据分析： 提供从细胞计数、共定位分析到空间关系挖掘的全套生物信息学解决方案。

4) 立即联系我们，让我们用精准的“视觉”技术，助您揭开肿瘤免疫微环境的更多奥秘！

即日起 Treg 分型技术服务样本数满5送1；

活动截止日期：2025年12月30日；

更多信息欢迎咨询：info@alphaxbio.com;